Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set1；12613ES
产品名称： Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set1；12613ES
英文名称： Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set1
产品编号： 12613ES02
产品价格： 0
产品产地： Yeasen
品牌商标： Yeasen
更新时间： 2024-12-10T13:25:09
使用范围： null
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
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- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
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Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina®
产品信息
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产品编号 |
规格 |
价格（元） |
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Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set1 |
12613ES02 |
96×2 T |
2753.00 |
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Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina® Set2 |
12614ES02 |
96×2 T |
2753.00 |
产品描述
Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina®是Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒，共分为2个Set，每个Set包含二代测序建库中使用的PE adapter以及 8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer。 2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer，配合Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®（Cat#12201）使用可构建多达384种不同组合的双端index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。
产品组分
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编号 |
名称 |
规格 |
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12613ES02 |
PE Adapter |
2×336 μL |
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i5 Index Primer 1-8 |
60 μL each |
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i7 Index Primer 1-12 |
40 μL each |
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12614ES02 |
PE Adapter |
2×336 μL |
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i5 Index Primer 9-16 |
60 μL each |
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i7 Index Primer 13-24 |
40 μL each |
运输与保存方法
冰袋运输。
所有组分-20°C保存，有效期1年。
注意事项
1）本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。
2）本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头，需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。
3）本试剂盒每个Set包含8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer，可以构建96种不同组合的双端Index标记文库，每个Set可构建192个DNA文库。2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer。您可以使用Cat#12613中的i5 Index Primer（或i7 Index Primer）与Cat#12614中的i7 Index Primer（或i5 Index Primer）组合用以构建多达384种不同组合的双端Index标记文库。
4）切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，建议分装保存，可短暂存放于4℃。
5）使用Hieff NGS® 384 Dual Index Primers Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina® 试剂盒操作说明进行。
接头连接（Adapter Ligation）：
在末端修复产物两端连接特定的Illumina®接头，即Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®操作步骤3.2。
1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量；
表1. 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度
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Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
推荐Adapter(15 μM)使用量 |
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400 ng |
30:1 |
3.5 μL |
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300 ng |
40:1 |
3.5 μL |
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200 ng |
60:1 |
3.5 μL |
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100 ng |
100:1 |
3.0 μL |
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50 ng |
100:1 |
1.5 μL |
【注】：Input DNA 摩尔数（pmol）≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度（bp）]
2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；
3. 配制表2所示反应体系；
表2. Adapter Ligation反应体系
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名称 |
体积（μL） |
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dA-tailed DNA |
60 |
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Ligation Enhancer |
30* |
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Quick T4 DNA Ligase |
5 |
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PE Adapter |
x** |
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ddH2O |
5-x |
【注】：*Ligation Enhancer比较粘稠，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。
**本公司接头浓度（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）与常规商业化试剂盒一致，皆为15 μmol/L。请根据注意事项三中的提示，计算接头用量。
4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；
5. 将PCR管置于PCR仪中，设置表3所示反应程序，进行接头连接反应：
表3. Adapter Ligation反应程序
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温度 |
时间 |
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热盖 |
Off |
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20°C |
15 min |
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4°C |
Hold |
【注】：当Input DNA量较低，实验效果不理想时，可尝试将连接时间延长一倍。
连接产物磁珠纯化（Post Ligation Clean Up）
该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的Adapter或Adapter Dimer等无效产物，分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要，详细操作步骤参照Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®建库试剂盒说明书。
文库扩增（Library Amplification）
该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集，使用本试剂盒接头时，该步骤为必做步骤；
1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；
2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系；
表4. PCR扩增反应体系
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名称 |
体积（μL） |
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