试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定牛血清,血浆及相关液体样本中瘦素(leptin)含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛瘦素(leptin)水平。用纯化的牛瘦素(leptin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入瘦素(leptin),再与HRP标记的瘦素(leptin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素(leptin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中牛瘦素(leptin)浓度。
试剂盒组成:
试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
说明书 |
1份 |
1份 |
|
封板膜 |
2片(48) |
2片(96) |
|
密封袋 |
1个 |
1个 |
|
酶标包被板 |
1×48 |
1×96 |
2 |
标准品:5400ng/L |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2 |
标准品稀释液 |
1.5ml×1瓶 |
1.5ml×1瓶 |
2 |
酶标试剂 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
样品稀释液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
显色剂A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
显色剂B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
终止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2 |
浓缩洗涤液 |
(20ml×20倍)×1瓶 |
(20ml×30倍)×1瓶 |
2 |
样本处理及要求:
1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为3600ng/L,2400ng/L ,1200ng/L,600ng/L,300 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置
上海研吉生物科技有限公司 商家主页
地 址: 上海市杨浦区民京路658弄
联系人: 陈小姐
电 话: 15821625591
传 真:
Email:muzhou88@aliyun.com
相关咨询
《材料化学期刊》:超疏油表面研究取得系列进展 (2012-03-08T00:00 浏览数:7581)
《纳米快报》:新装置可将人体热量转成电流 (2012-03-01T00:00 浏览数:6365)
《先进材料》:研究实现三维结构上多种细胞的可控分布 (2012-02-24T00:00 浏览数:6126)
《先进材料》:研究实现三维结构上多种细胞的可控分布 (2012-02-24T00:00 浏览数:5887)
《自然—遗传学》:图灵生物花纹形成理论获实验证明 (2012-02-23T00:00 浏览数:5921)
科学网:学习过程中脑细胞间会产生新联系 (2012-02-23T00:00 浏览数:5544)
《天体物理学期刊》:模拟计算表明星系间充满暗物质 (2012-02-17T00:00 浏览数:5525)
《自然—生物技术》:人转录组中存在大量RNA编辑 (2012-02-16T00:00 浏览数:4969)
JNCI:胃癌个体化疗研究获进展 (2012-02-15T00:00 浏览数:4903)
《实验社会心理学期刊》:研究发现姓名好发音易获好感 (2012-02-15T00:00 浏览数:4836)