植物梨火疫病菌(Erwinia amylovora)酶联免疫分析(ELISA)-分析方法-资讯-生物在线

植物梨火疫病菌(Erwinia amylovora)酶联免疫分析(ELISA)

作者:上海研吉生物科技有限公司 2011-10-20T00:00 (访问量:1124)

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中植物梨火疫病菌(Erwinia amylovora)含量。

实验原理:

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物梨火疫病菌(Erwinia amylovora)水平。用纯化的植物梨火疫病菌(Erwinia amylovora)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入Erwinia amylovora抗原,再与HRP标记的Erwinia amylovora抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Erwinia amylovora呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物梨火疫病菌(Erwinia amylovora)浓度。

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

封板膜

2片(48

2片(96

密封袋

1

1

酶标包被板

1×48

1×96

2-8保存

标准品:27ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8保存

标准品稀释液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8保存

标本要求:

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤:

1.         标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为18ng/L12ng/L 6ng/L3ng/L1.5ng/L)。

2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.         温育:用封板膜封板后置37温育30分钟。

4.         配液:将3048T20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水3048T20倍)倍稀释后备用。

5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.         温育:操作同3

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