人载脂蛋白C3(APO-C3)酶联免疫分析(ELISA)-分析方法-资讯-生物在线

人载脂蛋白C3(APO-C3)酶联免疫分析(ELISA)

作者:上海研吉生物科技有限公司 2011-11-01T00:00 (访问量:821)

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中载脂蛋白C3APO-C3含量。

实验原理:

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人载脂蛋白C3APO-C3水平。用纯化的人载脂蛋白C3APO-C3抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入载脂蛋白C3APO-C3),再与HRP标记的载脂蛋白C3APO-C3)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的载脂蛋白C3APO-C3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人载脂蛋白C3APO-C3)浓度。

试剂盒组成

试剂盒组成

      48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

封板膜

2片(48

2片(96

密封袋

1

1

酶标包被板

1×48

1×96

2-8保存

标准品:135ng/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8保存

标准品稀释液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8保存

样本处理及要求

1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8的温度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

操作步骤

1.         标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为90ng/ml60ng/ml 30ng/ml15 ng/ml7.5 ng/ml)。

2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。

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