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新品│Endonuclease VIII:精准切割DNA受损碱基,助力基因损伤修复研究

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2023-08-25T00:00 (访问量:9709)

 

核酸内切酶 Ⅷ(Endonuclease VIII, Endo Ⅷ)是一种具有N-糖基化酶活性(N-glycosylase)和AP-裂解酶(AP-lyase)活性的DNA损伤修复酶,参与氧化产生的DNA损伤的碱基切除修复。


 

 


作用原理


Endonuclease VIII识别双链DNA上受损碱基并在其N-糖基化酶活性作用下切除双链DNA上受损的嘧啶碱基,产生一个脱嘌呤(AP)位点。随后,在其AP裂解酶活性作用下切割AP位点的3'和5'端,产生一个具有3'和5'磷酸的碱基缺口。

 

图1. Endonuclease VIII反应原理示意图


 

 


翌圣Endonuclease Ⅷ


翌圣的Endonuclease Ⅷ(Cat#14536ES)由分子酶改造平台——ZymeEditor™重组表达而来,高纯度,无核酸外切酶、核酸内切酶以及RNase残留。可应用于单细胞凝胶电泳、NGS建库中DNA损伤修复、酶法合成DNA中释放DNA链、碱洗脱,搭配UDG(Cat#10303ES)进行含U片段的克隆等。

 

 


数据展示


01

受损碱基切除效果与进口品牌一致

 

 

分别使用翌圣与进口品牌N*的Endonuclease Ⅷ催化20 pmol寡聚核苷酸,20 µL反应体系中加入5~40 U的Endonuclease Ⅷ 和相同酶活的UDG(Cat#10303ES),37℃孵育1 h。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,翌圣Endonuclease Ⅷ与进口品牌N*的碱基切除效果一致。


 


图2. 受损碱基切除效果对比

 

02

无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留

 

 

将10 U Endonuclease VIII分别与相应的底物DNA/RNA在37℃孵育4 h,琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,Endonuclease VIII 无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留。


 


图3. 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留检测结果

 

 


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