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重磅! 双封闭Taq酶抗体消除假阳风险,引领全预混高效扩增技术

作者:苏州近岸蛋白质科技股份有限公司 2025-08-13T00:00 (访问量:2043)

随着分子诊断的不断发展,引物探针全预混试剂以方便快捷的优势成为热门需求。然而传统Taq酶抗体原料通常仅封闭Taq酶的聚合活性,其5'-3'外切酶活性仍然暴露,导致与探针混合后,在低温下仍发生探针切割释放信号,造成假阳性的问题。

 

为了解决上述问题,近岸蛋白特别推出双活性封闭的Taq酶抗体(目录号:Z088),与Taq DNA Polymerase 结合后,能够同时高效封闭其5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性,从而抑制低温条件下由引物的非特异性退火引起的非特异性扩增,和探针切割造成的假阳性,从而支持引物探针、酶以及Buffer等全预混qPCR/qRT-PCR体系的搭建。

 

产品特点

1)高特异性:与Taq 酶亲和力高,有效避免非特异性扩增;

2)热启动迅速:95 ℃、30 s 即可启动Taq 酶活性;

3)支持全预混:可将除模板以外的所有组分预混成一管,使用便捷高效;

4)适用范围广:适配野生型及多种突变型Taq酶的封闭。

 

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产品性能

1 双活性封闭性能优

将带有荧光标记的模板分别与未封闭、单封闭抗体以及双封闭抗体的Taq酶混合,50℃实时检测荧光值变化。结果显示,双封闭抗体能够很好的封闭Taq酶的5' - 3'聚合酶活性以及5' - 3'外切酶活性。同时使用双封闭抗体,品牌A和品牌B同类产品分别封闭Taq DNA聚合酶,检测封闭效果。结果显示,近岸蛋白产品的封闭效果优于品牌A和品牌B。

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图示1. 不同活性位点封闭效果测试

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图示2. 封闭效果验证

 

2 酶活释放快

使用5U/ul 双抗体封闭Taq DNA聚合酶,95℃下热启动30s。结果显示酶活释放速度快,95℃,30 s即可释放酶活,不影响后续扩增。

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图示3. 酶活释放效果测试

 

3 适配全预混

使用单封闭抗体,双封闭抗体分别封闭Taq DNA聚合酶,混合ASFV的引物探针制备成全预混试剂,在37℃放置7d后,分别扩增2000拷贝,200拷贝和20拷贝ASFV质粒。结果显示,双封闭抗体全预混的基线更平稳,扩增平台值更优,且37℃稳定性强,与-20℃保存试剂扩增无明显差异。

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图示4. 不同抗体封闭的全预混效果测试

 

4 稳定性强

使用热加速破坏性试验测试双封闭抗体的稳定性。在37℃放置2d、5d、7d和14d,通过荧光法检测发现双封闭抗体(Z088)在14d封闭效果表现优异,稳定性更高。

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图示5. 双封闭抗体稳定性测试

5 适用范围广

使用双封闭抗体分别封闭野生型和突变型TaqDNA 聚合酶,通过荧光法检测封闭效果。结果显示,对于不同类型的Taq酶,近岸蛋白双封闭抗体封闭效果表现优异。

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图示6. 双封闭抗体适配不同类型的Taq酶

 

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