杀稻瘟菌素S的作用原理

杀稻瘟菌素S（Blasticidin S）是一种从灰色链霉菌（Streptomyces griseochromogenes）中提取的核苷类抗生素，主要通过干扰核糖体中肽键的形成来特异性抑制原核和真核细胞的蛋白质合成。其具体作用机制包括阻断释放因子诱导的肽基-tRNA水解，并增强tRNA与核糖体大亚基的结合，从而在一定程度上抑制肽键的形成。

杀稻瘟菌素S具有快速而强效的作用模式，很低的抗生素浓度便能导致细胞迅速死亡。它不仅对细菌和真核生物中的蛋白质合成有显著抑制作用，还对真菌、线虫和肿瘤细胞也具有活性。杀稻瘟菌素S常用于筛选携带bsr或BSD基因的转染细胞。

杀稻瘟菌素S的应用

01细胞培养与筛选

哺乳动物细胞：杀稻瘟菌素S常用于筛选携带bsr或BSD基因的转染细胞。这些抗性基因分别来自蜡样芽孢杆菌和土曲霉，能够将杀稻瘟菌素转化为无毒的衍生物，从而实现对未携带抗性基因细胞的选择性杀死，哺乳动物细胞中Blasticidin S的工作浓度范围在1-50 μg/mL。

细菌选择：在细菌培养中，推荐使用浓度为25-100 µg/mL，可以迅速导致未携带抗性基因的细胞死亡。

E. coli对Blasticidin S的敏感性稍差，但是转化子对Blasticidin S具有耐受性，可以用低盐LB培养基（pH 8）进行筛选，浓度范围为50-100 μg/mL Blasticidin S，高pH值可以提高Blasticidin S的活性。

植物细胞：同样适用于植物细胞的基因转移实验，常用bsr和BSD作为筛选标志。

02研究蛋白质合成

杀稻瘟菌素S被用于研究肽键形成水平上的蛋白质合成过程，特别是在TLR-2构建体的HEK293-T细胞和HEK-D5细胞中的应用。

03抗真菌特性

它还具有一定的抗真菌活性，可用于预防和治疗稻瘟病。其杀菌作用主要是影响蛋白质的合成，并且能够抑制孢子萌发、菌丝发育和孢子形成。

04其他应用

杀稻瘟菌素S也被用于研究肿瘤细胞的抑制效果。
它还可以作为含有抗性基因bls、bsr或BSD的转化细胞的选择剂。

稻瘟菌素S的相关实验步骤（哺乳动物稳转株筛选）

1）Blasticidin S通常使用浓度为10 μg/mL。携带bsr或BSD基因的质粒转染到细胞中，在含有Blasticidin S的正常生长培养基中孵育，用于筛选稳定转染细胞株。

2）转染后48 h，用含有适宜浓度Blasticidin S的新鲜培养基将细胞传代（注：细胞处于活跃分裂期时抗生素工作最好。细胞密度太高，抗生素效率降低。细胞分盘时覆盖率最好不超过25%）。

3）每3-4天去除培养基，加入含抗生素的新鲜培养基。

4）7天后检测细胞集落形成。根据宿主细胞种类和转染/筛选效率，集落形成可能需要增加一周或更久。

5）转移5-10个耐受克隆到35 mm细胞盘中，加入选择培养基维持培养7天。随后用细胞毒性实验进行检测。 

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