体外血脑屏障（BBB）模型是研究药物或分子穿过BBB能力的重要工具。本文以hCMEC/D3细胞为例，介绍构建体外BBB通透性实验的关键步骤。
首先，将hCMEC/D3细胞接种于Transwell膜上，使用内皮细胞专用培养基（如EGM-2或EndoGRO）在37℃、5% CO₂条件下培养5-7天，形成紧密的单层屏障。实验前，Transwell膜需用胶原蛋白或纤维连接蛋白包被，以增强细胞附着和屏障功能。
实验时，在Transwell上室加入含测试样品（如药物、抗体或纳米颗粒）的培养基，下室加入完全培养基。孵育后，于特定时间点（如2小时、4小时、24小时）收集下室液体。使用荧光标记物（如FITC-Dextran）作为对照，通过荧光分光光度计或高效液相色谱（HPLC）检测样品浓度，计算转胞效率（TE）。
通透性计算公式为：
通透性 (%) = (基底侧浓度 × 基底侧体积) / (样品侧浓度× 样品侧体积) × 100%。
该实验通过模拟BBB的屏障功能，评估药物或分子穿过BBB的能力，为中枢神经系统（CNS）药物开发提供重要依据。hCMEC/D3细胞构建的体外BBB模型具有高TEER值和良好的屏障特性，适用于高通量筛选、大分子药物渗透性研究及BBB转运机制探索。
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体外BBB模型中的通透性（转胞吞作用）检测平台：
我们用hCMEC/D3， bEnd.3 和U251构建了一系列的体外血脑屏障模型用于检测抗体透过血脑屏障的通透性。
