有没有专用于昆虫细胞High Five培养的无血清细胞培养基呢?-技术前沿-资讯-生物在线

有没有专用于昆虫细胞High Five培养的无血清细胞培养基呢?

作者:北京义翘神州科技有限公司 2019-02-18T09:32 (访问量:6599)

昆虫细胞培养起始于1915年,距今已超过百年的时间,广泛应用于细胞生物学、分子生物学、昆虫学、病毒学、医学等研究领域。昆虫细胞培养基也经历了天然培养基、合成培养基和无血清培养基三个阶段,尤其是无血清培养基含有细胞所需营养物质,添加无动物源的细胞生长因子,在保证细胞生长良好的基础上,是昆虫细胞用于更多的研究领域。

现在,研究和应用较多的昆虫细胞系主要为草地贪叶蛾卵巢细胞系Sf21及其克隆株Sf9,和粉纹夜蛾胚胎细胞系High Five。昆虫细胞系对模式病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)敏感,构建成实验室常用的昆虫杆状病毒细胞表达平台。昆虫杆状病毒表达平台具有重组蛋白表达量高、蛋白翻译后修饰全面、适合大规模生产等优势,已广泛用于药物研发、疫苗开发等领域。

义翘神州经过多年细胞培养研发,开发出了SIM HF培养基。这是一款专门用于培养High Five细胞的无血清无蛋白添加的培养基。SIM HF培养基不含动物源组分、不含血清、不含抗生素,由基础培养基和添加组分(促生长因子、酶抑制剂、结合蛋白、转运蛋白、微量元素等)构成,可用于实验研究、工业生产。

SIM HF无血清培养基属于即用型完全培养基,适用于细胞增殖、蛋白表达,与市场上的类似产品相比,性能更优越,可以提供更高的细胞生长密度,更高的重组蛋白产量。SIM HF培养基已有上千例蛋白表达成功案例,NatureCell等顶级期刊都有文章发表。

SIM HF培养基在GMP级车间生产,严格控制细胞生长、无菌、无支原体等各项指标。培养基生产线能够实现大量制备,保证培养基批次间性能稳定。无血清昆虫细胞培养基价格低廉,只有进口产品的几分之一,能大大节省研究成本,特别适合有长期、大量需求的客户。

SIM HF培养基产品的基本参数:

外观

淡黄色澄清溶液

适用细胞株

BTI-TN-5B1-4 (High FiveTM)

渗透压

340-400 mOsm/kg

细胞接种密度

0.3-0.6×106 cells/mL

pH

6.0–6.5

最大细胞密度

>6×106 cells/mL

无菌检测

无菌

倍增时间

< 26 hrs

储存

2-8,避光

细胞培养评价

优良

推荐使用时间

见瓶签

病毒感染复数(MOI

0.5-2.5

SIM HF培养基使用基本步骤

细胞培养、传代

将细胞接种到摇瓶、大培养三角瓶或生物反应器中,细胞培养体积勿超过摇瓶体积的1/3

培养条件为27±1 ℃,摇床转速为150 rpm(不同摇床转速可能有差异,如细胞生长不好,请摸索最佳转速,刚复苏的细胞建议使用较低转速进行适应性培养);

当细胞密度生长达到2~3×106 cells/mL时,可以进行传代。

用新鲜的培养基将细胞稀释至合适密度( 0.3-0.6×106 cells/mL ),接种至合适的容器中。

细胞冻存

选择处于对数生长期的细胞,保证活率大于90%

制备细胞冻存液:45% 新鲜培养基,45% 条件培养基, 10% 二甲基亚砜溶液(DMSO) ;

200 g离心5 分钟,弃去上清;

用细胞冻存液重悬细胞, 取样计数,调整细胞密度;

迅速分装细胞至无菌的冻存管中,每管1~2 mL,密封;

将冻存管放入程序降温盒中,-70 ℃冰箱放置过夜; 如需要长期保存,在液氮罐中保存。

细胞复苏

将冻存管迅速转移至27℃水浴中,进行融化。

将融化的细胞转至无菌的含5-10ml新鲜培养基的无菌离心管中。

200g低速离心5分钟,缓慢倒掉上部培养基,不要将沉降的细胞悬起。

15-20ml新鲜培养基重悬细胞,确保重悬后的细胞密度为0.6×106/ml左右。

将重悬的细胞放入无菌培养瓶中,旋盖拧松,放在摇床中悬浮培养。

当细胞密度生长达到2~3×106/ml时,可以进行传代,传代密度为0.4-0.5×106/ml

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